Mejores prácticas de validación de desinfectantes en salas blancas

Los desinfectantes usados en salas blancas de las industrias farmacéutica, biotecnológica y de dispositivos médicos se deben validar para su uso previsto. Esta es una expectativa normativa para garantizar que se use el desinfectante adecuado y se mantenga el control microbiano en el entorno. Las pruebas de eficacia del desinfectante son uno de los componentes de la validación, en la que se pone a prueba la eficacia antimicrobiana del desinfectante en el laboratorio. En el consejo técnico siguiente, se proporcionan recomendaciones de mejores prácticas para las pruebas de eficacia de desinfectantes de laboratorio.

Expectativas generales

La dilución de uso, tiempo de contacto y temperatura de exposición del desinfectante evaluado en el estudio deben coincidir con las condiciones de uso reales y previstas del desinfectante en el área clasificada.

En lo normativo, es fundamental evaluar los aislados del sitio obtenidos del monitoreo ambiental (EM). Seleccione los aislados que usará en las pruebas de eficacia del desinfectante después de que se hayan establecido las condiciones iniciales de EM.  

Se deben basar en:

• Frecuencia con que ocurren
• Dificultad prevista o demostrada de desinfección (p. ej., Bacillus cereus)
• Que ocurran en grandes cantidades, cuando se recuperan

Pruebas de probetas

Colabore con los fabricantes de superficies para salas blancas en la obtención de probetas (muestras) representativas de los materiales de las superficies de las áreas clasificadas. Las superficies con especificaciones bien definidas (p. ej., 304 SS, 316L SS) se pueden obtener de opciones generales de abasto.

La condición de la probeta puede tener impacto significativo en las pruebas de eficacia del desinfectante. Las probetas:

• No deben tener óxido o marcas que no sean representativas de las superficies de las áreas clasificadas
• Deben ser planas
• No deben estar sobre un soporte absorbente o que desprenda pelusas o escamas

Evalúe la tolerancia al calor de las probetas de material de la superficie, si se procesan en un esterilizador de calor húmedo. También se puede utilizar la descontaminación química con un esporicida, como el esterilizante Spor-Klenz™ RTU. El procesamiento inadecuado de probetas puede afectar negativamente a las pruebas.

Microorganismos

Aumente la probabilidad de cultivos bacterianos vegetativos viables:

• Incubando los cultivos durante 18-24 h en el caso de la mayor parte de las bacterias vegetativas
• Use las suspensiones en 2 h si se almacenan a temperatura ambiente o en 24 h si se almacenan en refrigeración
• Use una curva de espectrofotómetro para estimar los niveles de unidades formadoras de colonias (UFC) en suspensión, en lugar de esperar los resultados de poblaciones.

Asegúrese de que la concentración de la suspensión del inóculo sea suficiente para demostrar la reducción de log10 requerida. Considere el límite de detección del método de recuperación y la pérdida potencial de células viables debido a la mortalidad por desecación. Los estudios preliminares de secado de especies problemáticas, como Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans, pueden evitar la necesidad de repetir pruebas relacionadas con recuperación baja.

Si se trabaja con una suspensión de esporas micóticas (conidios), es necesario filtrar dicha suspensión para eliminar los fragmentos de micelios. La filtración se puede lograrse con diversos materiales filtrantes, como lana de vidrio estéril o un filtro fritado. La presencia de fragmentos de micelios o hifas podría proteger a las esporas micóticas del contacto con el desinfectante o esporicida.

Asegúrese de que se usen los criterios adecuados de aceptación de la reducción log10 para evaluar la eficacia de los desinfectantes. En USP <1072>, Antisépticos y desinfectantes, se solicita:

• Reducción de 3 log10 de bacterias vegetativas
• Reducción de 2 log10 de esporas bacterianas

Estos son los criterios de aceptación apropiados para las pruebas de eficacia desinfectante en un entorno de fabricación aséptica.

Procedimiento de laboratorio

Si se almacena una dilución de uso de un desinfectante concentrado (p. ej., en un tanque de retención o un frasco para atomización), es una expectativa normativa contar con datos que respalden la fecha de vencimiento establecida internamente de la dilución de uso.

Tenga extrema precaución para evitar que se depositen organismos fuera del área de exposición del producto de prueba prevista. Tan solo 0.01 µl de inóculo que no esté expuesto al producto de prueba puede llevar al fracaso de una prueba.

Se debe realizar una validación de neutralización para calificar un tiempo de contacto húmedo discreto. En USP <1227>, Validación de la recuperación microbiana de artículos farmacopeicos; USP <61>, Examen microbiológico de productos no estériles: pruebas de enumeración microbiana, y EN 13697, Antisépticos y desinfectantes químicos, se proporcionan diseños potenciales de estudios para validar la neutralización. Abajo se muestra una lista de neutralizadores químicos comunes para ingredientes activos específicos.

TABLA 1. Neutralizadores químicos de activos desinfectantes comunes

Evaluar los medios de cultivo apropiados y las condiciones de incubación para cada organismo antes del inicio del estudio.

La recuperación por inmersión de las probetas suele ser el método de recuperación más eficaz. En ASTM E2197, Método de prueba de portador de disco cuantitativo estándar, y EN 13697, Antisépticos y desinfectantes químicos, se proporcionan posibles métodos de recuperación por inmersión. El tamaño de la probeta de superficie puede afectar significativamente al método de recuperación. La idoneidad de los métodos de recuperación se debe evaluar con probetas específicas de la superficie en estudio.

Otros recursos:

• USP <1072> Disinfectants and Antiseptics
• PDA TR 70 Fundamentals of Cleaning and Disinfection Programs for Aseptic Manufacturing Facilities
• EN 13697 Chemical Disinfectants and Antiseptics
• ASTM E2197 Standard Quantitative Disk Carrier Test Method
• ASTM E2614 Standard Guide for Evaluation of Cleanroom Disinfectants